RECOLECCION DE MUESTRAS PARA RECUPERACION DE MICROORGANISMOS

RECOLECCION DE MUESTRAS EN HUMANOS, PLANTAS, ANIMALES Y MEDIO AMBIENTE

El diagnóstico de las causas de enfermedad o muerte que afectan a las diferentes seres vivos es muy importante para la aplicación rápida de los métodos de profilaxis.

Es importante tener en cuenta que el tipo de muestra, las condiciones de envío y su conservación son factores claves para interpretar correctamente los resultados analíticos. El profesional de campo tiene la responsabilidad de seleccionar, recolectar, preservar y enviar adecuadamente las muestras convenientes para el diagnóstico.

Normas Generales

Para la adecuada recolección, conservación y envío de las muestras, es indispensable tener presentes las siguientes normas:

• Toda muestra debe ser remitida con su historia clínica o ficha de envio completa y perfectamente identificada.

(Ejemplo para plantas)

• Las muestras deben tomarse antes de la administración de medicamentos y empleando siempre material estéril y seco, en algunos casos es necesario utilizar medios de transporte.
• Los envases utilizados para el envío de muestras deben ser en lo posible irrompibles, herméticos y de dimensiones adecuadas. El tiempo entre la obtención de la muestra y su llegada al laboratorio no debe extenderse más de 24 horas.
• Deberá darse información clara sobre el animal, la planta o la persona que se le ha extraido la muestra.

Manejo de muestras para microbiología

El éxito y valor final de analizar una muestra clínica en el laboratorio de bacteriología, depende inicialmente del cuidado ejercido en la selección, recolección y envío de la muestra. La muestra seleccionada debe ser aquella que es más probable que contenga el agente causal y se debe hacer un esfuerzo para evitar su contaminación con organismos del medio ambiente.

Material básico de toma de muestras

1)Tubos estériles y cierre hermético, tipo Venojet.
Sin anticoagulante, para envío de sueros, leche, y otros líquidos. Dos ó
tres mililitros es un volumen de muestra suficiente.

Con anticoagulante:

• Heparina, para envío de sangre si se solicita cultivo bacteriano o cultivo de células linfoides (viremias, tuberculosis, etc).
• EDTA o Heparina para búsqueda de hemoparásitos y envío de líquido articular o cefalorraquídeo.

2) Frascos con cierre hermético

Destinados al envío de órganos, tejidos, heces, etc. Evitar los frascos de cristal por la posible rotura. Se pueden utilizar los envases de recogida de orina de farmacias. En ningún caso se deben mezclar órganos diferentes en el mismo frasco porque se favorecen las contaminaciones bacterianas.

3) Jeringas y agujas estériles

Para la extracción de sangre, líquido articular, líquido cefalorraquídeo, contenido estomacal.

4) Bolsas herméticas

Si no se dispone de envases herméticos para organos. Es imprescindible dejar escurrir el órgano para que se elimine el máximo de líquidos, así como hacer varios nudos para optimizar el cierre. En ningún caso mezcle diferentes órganos en la misma bolsa y recuerde identificar cada una de ellas.

5) Hisopos con medio de transporte.

El medio de transporte evita la desecación de las células y limita el deterioro de la muestra.

Permiten tomar muestras de tipo: hisopos rectales, nasofaríngeos, vaginales, oculares, cutáneos, etc. Se recomienda enviar inmediatamente al laboratorio.

6) Guan tes

son indispen sables para la manipulacion del ser vivo: plantas, animales o humanos, a los que se les va a reali z ar la toma de las muestras.

ALGUNOS ARTICULOS DE INTERES

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RECOLECCION DE MUESTRAS EN ANIMALES

Prevalencia de mastitis bovina y su etiología infecciosa en sistemas especializados en producción de leche en el altiplano cundiboyacense (Colombia)

La mastitis bovina, es una reacción inflamatoria de las glandulas mamarias de la vaca por la presencia de microorganismos patogenos, produciendo alteraciones fisicas y quimicas en la leche. Actualmente se conoce la mastitis contagiosa, causada por microorganismos como: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynobacterium bovis y Mycoplasma spp su transmision puede ocurrir en el momento de ordeño, por el compartimiento de toallas para el lavado de las ubres o por la falta de asepsia del personal de ordeno. La mastitis ambiental es producida por microorganismos del ambiente como: Escherichia coli, Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp, Pseudomonas, Proteus y Streptococcus dysgalactiae.

En una muestra de 2.854 vacas de 40 fincas proveedoras de leche del Altiplano Cundiboyacense , se realizo el aislamiento de microorganismos involucrados con la mastitis bovina. Se realizó una limpieza y asepsia con aldohol etilico al 70% usando varias torundas de algodon por pezón hasta que estas no presentaran suciedad, posteriormente se tomaron 5 ml de leche en un tubo esteril de tapa rosca y llevadas a refrigaración. luego se realizo el sembrado en agar Sangre, el cual permite el crecimiento de dieferentes microorganismos ya que es altamente nutritivo y permite observar el tipo de hemolisis que realicen estos; agar MacConkey, el cual sirve como medio selectivo; y agar Ogy destinado para ver el crecimiento de hongos, estos medios fueron incubados entre 18 y 24 horas. Posteriormente se realizó la coloracion de Gram para determinar morfologia y afinidad de los microorganismos que crecieron. A los cocos Gram positivos se les realizó la prueba de la catalasa y coagulasa para confirmar el genero y la especie con la utilizacion de los sistemas de identificacion comercial, llegando a la identificacion del Staphylococcus aureus el cuales es coagulasa positivo y a los negativos, se les diferencio como Streptococcus sp. A los bacilos Gram negativos se les realizó pruebas de la oxidasa para determinar el genero y la especie.

Al conocer el genero y la especie de los diferentes microorganismos, se encontró que el Staphylococcus aureus es el principal agente etiologico, ya que utiliza como reservorio principal la glandula mamaria de la vaca, pero tambien se puede encontrar en la cavidad nasal de las novillas, en el piso de los establos, en las manos de los trabajadores, en los equipos de ordeño, y en las aguas. Tambien se aislaron y se identificaron otros microorganismos entre los que se encontran los Staphylococcus Coagulasa negativos en el segundo lugar de insidencia, despues del Staphylococcus aureus.

Se puede concluir que la presencia y la propagación del principal patogeno de la mastitis, está dado por las malas practicas ganaderas efectuadas en las fincas, ya sea por parte de los ordeñadores o del personal en general. Es importante que se realicen programas de prevención y limpieza, para erradicar a los microorganismos patogenos , como también es necesario el compromiso por parte de los trabajadores con respecto a la asepsia que se debe manejar al momento de realizar la extracción de leche, por el bien del consumidor, del animal y el bien propio.

RECOLECCION DE MUESTRAS EN ANIMALES

BROTE DE DERMATOFILOSIS EN TERNEROS

La Dermatofilisis es una enfermedad que ataca a la espidermis de bovinos, equinos, ovinos, animales salvajes y al hombre con una zoonosis menor. Esta patologia se caracteriza por lesiones inflamatorias, sangrantes con formacion de costras, todo esto causado por la presencia de la bacteria Dermatophilus congolensis, estas lesiones son muy dolorosas, las cuales luego se vuelven costras y posteriormente se caen.

Una muestra de terneros Holando, fue objeto para diagnosticar la presencia de este patogeno, ya que presentaban lesiones en la piel, no pruriginosas, sangrantes y dolorosas terminando en costras que se desprendian junto con los pelos, inicialmente en la cara y luego desplazandose al lomo y miembros postariores.

Toma de muestras

Se extrajeron costras y exudados de la parte afectada de los terneros con un hisopo esteril y fueron enviadas al laboratorio en el medio de transporte Stuar, en donde se realizó un cultivo en el medio Sabouraud para descartar la presencia de Dermatofitos, un grupo de hongos que tambien afecta a la epidermis.

las costras se ablandaron en agua destilada esteril y posteriormente se tiñeron con tincion de Gram, para la identificacion de Dermatofilosis como tambien se realizó el sembrado de estas en agar sangre en forma aerobica y microaerofilia.

Resultados

No hubo crecimiento de Dermatofitos y la tincion de Gram reveló la existencia de cocos y filamentos Gram positivos ramificados, caracteristico de Dermatophilus congolensis, las placas de agar sangre revelaron la produccion de una Beta hemolisis, por lo anterior se descarto la presencia de Dermatofitos y se confirmo el diagnostico de Dermatophilus congolensis gracias a los aislamientos realizados en el laboratorio y las caracteristicas de los sintomas que presentaron los animales, los cuales son caracteristicos de la acción de este patogeno y como consecuencia, se puede proceder a administrar el tratamiento necesario al animal para preservar su vida.

RECOLECCION DE MUESTRAS EN HUMANOS

Recomendaciones para el diagnóstico microbiológico

de la infección urinaria

Este documento es una recomendación para el procesamiento de los urocultivos e intenta unificar los criterios para la interpretación de este examen. Estas recomendaciones están fundamentadas en las Guías de la Sociedad Americana de Microbiología y en el aportede los miembros de Comité de Microbiología Clínica de la Sociedad Chilena de Infectología, considerando las dificultades y problemas a los que puede verse enfrentado el microbiólogo en su práctica profesional consideraciones generales respecto de la infección del tracto urinario (ITU) más común en humanos, bacterias conocidas como especies uropatógenas. La muestra de orina para urocultivo es la más frecuentemente recibida y procesada en los laboratorios de microbiología. Aproximadamente 20 a 22% de los urocultivos tienen un resultado positivo. La presencia de bacteriasen la orina puede corresponder a varios síndromes clínicos que poseen mecanismos patogénicos propios y significado clínico, tratamiento y pronóstico diferentes, dependiendo del tipo de huésped.

Es necesario distinguir algunos síndromes clínicos: bacteriuria asintomática, cistitis y síndrome uretral agudo.

Obtención de muestra

Se considera una etapa crucial en el procesamientode los urocultivos ya que la posibilidad de contaminación con bacterias de la flora comensal de piel, periné y uretra distal, es muy alta e induce a la generación de resultados falsamente positivos. La Sociedad Americana de Microbiología considera aceptable un porcentajede contaminación en las muestras de orina no superior a 5%2,3. Se describen al menos 5 métodos para la obtención de orina a cultivar.

Recomendaciones

- Preferentemente se debe obtener la primera orina de la mañana . De no ser posible, el paciente debe abstenerse de orinar durante las 3 horas previas al examen.

- No forzar la ingestión de líquidos, ya que con ello se diluye la orina, alterando el recuento.

- Volumen mínimo: 3 ml.

Métodos para la obtención de la muestra de Orina de segundo chorro:

Es la más frecuentemente procesada para urocultivo, por su fácil obtención, sin embargo se puede contaminar con flora de la piel, uretra y vagina en mujeres. Requierede un aseo genital prolijo con tórulas, agua y jabón.

Orina obtenida mediante recolector:

No en una buena muestra, ya que se puede contaminar con flora perineal. Es útil sólo si el cultivo resulta ser negativo o si se aisla, en recuento significativo, una especie uropatógenaúnica. Para este procedimiento se recomienda el cambio de recolector cada 30 minutos hasta obtener la muestra de orina.

Orina obtenida a través de catéter vesicalpermanente:

No es una buena muestra excepto que el catéter haya sido recientemente instalado. Generalmente los catéteres vesicales están colonizados ya a las 48 horas de instalados 4 y los microorganismos aislados no necesariamente son el agente causal de la infección urinaria. La superficie externa del catéter debe limpiarsecon una tórula con alcohol 70% y esperarque seque. La punción se efectúa en unángulo de 30° en el sitio indicado para ello. No debe pinzarse el catéter antes de obtener la muestra.

Punción vesical:

Es el método de referencia para la obtención de orina a cultivar ya que evita la contaminación con flora uretral; sinembargo, se reserva para casos especiales por ser un procedimiento invasor.

Cateterización vesical transitoria:

Se considera una alternativa a la punción vesical pero es también un procedimiento invasor y puede generar arrastre retrógrado de microorganismos.

RECOLECCION DE MUESTRAS EN HUMANOS

Infecciones vaginales en menores de 15 años sin vida sexual del
Municipio de Esperanza, Puebla

Desde hace varios años la Secretaría de Salud Pública ha realizado un arduo trabajo en coordinación con médicos y enfermeras en poblaciones rurales y urbanas para prevenirlas enfermedades y fomentar la salud en cada persona. Gracias a las nuevas propuestas establecidas por el gobiernofederal se ha abierto una posibilidad para mejorar la calidadde vida dentro de las consultas de primer nivel. Sin embargo,esto no ha sido suficiente para prevenir enfermedades ya sea por la falta de información o educación de la poblaciónen general o por la falta de recursos con los que se cuenta, tanto materiales para proporcionar un tratamiento.En el área de consulta externa del Municipio de Esperanza, Puebla se encuentra una gran demanda en atención médica en el grupo femenil de los 6 a los 15 años dentro del área de ginecología y obstetricia, abarcando diversas patologías mamarias y del aparato reproductor femenino, así como embarazos de alto riesgo. Esta investigación se dispone a abordar las infecciones vaginales y su forma de transmisiónen este grupo de edad, las cuales representan una gran incidencia dentro del municipio, ya que de no tratarse de manera adecuada estaríamos ignorando una patología que posteriormente se volverá crónica y que podría originar una de las principales causas de mortalidad : el cáncer cervicouterino. La mayoría de las pacientes son menores de 15 años que no cuentan con vida sexual y se encuentran seleccionadas dentro de un control para obtener datos fidedignos que nos permitirán valorar la importanciade la misma. Se encontró que el principal agente etiológicode las infecciones vaginales en menores de 15 años es causada por Escherichia coli, secundariamente por Candida albicans, la mayoríade éstas por presentar deficiencia en la higiene personal. Es importante no olvidar que la educación en la higiene personal juega un importante papel dentro de la salud, por consiguiente la responsabilidad directa cae sobre todas laspersonas que ejercen la medicina, ya que desde un inicio deben estar conscientes que en general muy pocas áreas de México cuentan con nivel de educación adecuado y se debe enseñar las medidas preventivas necesarias.

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS VEGETALES

Hongos filamentosos con actividades ligninolíticas aislados de Calamagrostis nitidula Pilg.

Se realizo la colecta de de muestras de Calamagrostis nitidula para ser procesada; para ello,se cortó en trozos pequeños y se sembró en medio líquido de sales minerales Czapeck teniendo a la lignina como única fuente de carbono 0,2% (Lignin álcali low sulfonate content, ALDRICH). El medio líquido Czapeck-Lignina fue llevado a un pH 5,5, a una temperatura de laboratorio de 25 °C y una humedad relativa de 65%, en cultivos sumergidos estáticos y en oscuridad. Los cultivos líquidos fueron evaluados durante 30 días, este procedimiento fue realizado para observar los hongos con actividad ligninolitica aislados de la planta forrajera Calamagrostis nitidula Pilg. (Poaceae).


Al realizar el aislamiento de la muestra para identificar la actividad ligninolitica de los hongos desarrollados fueron aislados en agar papa dextrosa (APD) luego de haber sido identificados según sus características macroscópicas y microscópicas, se identificaron los siguientes géneros: Alternaria, Ulocladium, Trichoderma, Cephalosporium, Helicomyces, Mucor y Aspergillus.
Al observar la capacidad de degradación de lignina se logro determinar por medición cualitativa y cuantitativa, inoculando cada cepa obtenida en tubos con caldo Czapeck con 0,2% de lignina y 1% de glucosa.
Con las observaciónes de los diferentes medios de cultivo se logro concluir que la cepa PD5F identificada como Aspergillus melleus Yukawa
fue la única con actividad ligninolitica.